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癥狀類型 | 可能的原因 | 解決方案 |
基線噪聲大 | 隨機(jī)性-污染物積聚 | 沖洗柱;凈化樣品;使用HPLC級(jí)溶劑 |
連續(xù)性-檢測(cè)器燈故障 | 更換紫外燈(壽命為1000小時(shí)) |
偶然性-外部電氣干擾 | 使用LC系統(tǒng)專用穩(wěn)壓器 |
樣品量過(guò)大 | 進(jìn)樣量應(yīng)為流動(dòng)相進(jìn)樣量的1/6 |
雙峰 | 樣品量過(guò)大 | 進(jìn)樣量應(yīng)為流動(dòng)相進(jìn)樣量的1/6 |
進(jìn)樣溶劑過(guò)強(qiáng) | 使用較弱的進(jìn)樣溶劑或流動(dòng)相 |
濾芯堵塞 | 更換并使用0.5μm孔隙率的在線過(guò)濾器 |
柱有空隙或氣溝 | 用玻璃珠或填料填充空隙;重填柱 |
進(jìn)樣器流路不通暢 | 更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子 |
柱頭有空隙 | 使用填料或玻璃珠填充柱頂部 |
柱上樣品超載 | 使用更高負(fù)載量的固定相;增加色譜柱內(nèi)徑;減少樣品量 |
單峰-存在干擾性組分 | 凈化樣品;預(yù)分離 |
拖尾峰 | 開(kāi)始出雙峰 | 請(qǐng)參見(jiàn)雙峰 |
存在未掃的死體積 | 減少接頭的數(shù)量;確保進(jìn)樣器密封墊緊密;確保接頭正確固定 |
堿性化合物-硅醇相互作用 | 換成聚合物固定相 |
堿性物質(zhì)-硅醇相互作用 | 使用更強(qiáng)的流動(dòng)相或添加競(jìng)爭(zhēng)堿(例如,) |
硅膠基-柱降解 | 使用特種色譜柱;聚合物柱或空間位阻 |
峰展寬 | 進(jìn)樣量過(guò)大 | 降低進(jìn)樣溶劑的強(qiáng)度以集中溶質(zhì) |
進(jìn)樣閥中的峰擴(kuò)散 | 在進(jìn)樣前/后引入氣泡以減少擴(kuò)散 |
數(shù)據(jù)系統(tǒng)的采樣速率過(guò)低 | 增大采樣 |
檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)低 | 調(diào)節(jié)時(shí)間常數(shù)使之與峰寬匹配 |
流動(dòng)相粘度過(guò)高 | 提高柱溫 |
檢測(cè)器流通池容積過(guò)大 | 使用盡可能小的池容積(系統(tǒng)中無(wú)熱交換器) |
注射器體積過(guò)大 | 減少進(jìn)樣量 |
保留時(shí)間長(zhǎng) | 使用梯度洗脫或較強(qiáng)的流動(dòng)相 |
壓力波動(dòng) | 單向閥泄漏 | 更換單向閥 |
泵密封墊泄漏 | 更換泵密封墊 |
微粒積聚 | 過(guò)濾樣品；在線過(guò)濾器;過(guò)濾流動(dòng)相 |
壓力漸增 | 微粒積聚 | 過(guò)濾樣品；在線過(guò)濾器;過(guò)濾流動(dòng)相 |
水/有機(jī)系統(tǒng)-緩沖液沉淀 | 測(cè)試緩沖液-有機(jī)混合物;確保兼容性 |
保留時(shí)間超出總滲透體積 | 體積排阻-特異性相互作用 | 添加流動(dòng)相改性劑或更改溶劑 |
保留時(shí)間不斷變動(dòng) | 柱溫不斷變化 | 使柱恒溫;絕緣;保證實(shí)驗(yàn)室溫度恒定 |
平衡時(shí)間不足以適應(yīng)梯度洗脫要求,或梯度洗脫流動(dòng)相起變化 | 確信在溶劑改變或梯度結(jié)束后至少10個(gè)柱容積通過(guò)色譜柱 |
流動(dòng)相組分選擇性蒸發(fā) | 減少氦氣的劇烈脫氣;保持溶劑貯器蓋好;制備新的流動(dòng)相 |
緩沖能力不足 | 用>20mM濃度的緩沖液 |
在線流動(dòng)相混合不一致 | 保證梯度系統(tǒng)輸送恒定組成;與手動(dòng)制備流動(dòng)相核對(duì) |
污染積聚 | 沖洗色譜柱以去除污染物 |
最初幾次進(jìn)樣-吸附在活性部位 | 用濃樣品進(jìn)樣沖洗柱,使其處于正常狀態(tài) |
保留時(shí)間逐漸縮短 | 流速在增加 | 檢查泵以確保正確;否則需重調(diào) |
柱上進(jìn)樣超載 | 減少樣品 |
鍵合固定相的流失 | 保持流動(dòng)相pH值在2-8.5間 |
保留時(shí)間逐漸增加 | 流速在減慢 | 解決液流中的漏液現(xiàn)象,更換泵密封墊,檢查泵的渦流和氣泡 |
硅膠填料的活化點(diǎn) | 使用流動(dòng)相改性劑 |
鍵合固定相的流失 | 保持流動(dòng)相pH值在2-8.5間 |
流動(dòng)相組成在變化 | 確保流動(dòng)相容器蓋好 |
硅膠填料的活化點(diǎn) | 流動(dòng)相中加競(jìng)爭(zhēng)堿 |
硅膠填料的活化點(diǎn) | 固定相用更高覆蓋度的填充料 |
靈敏度問(wèn)題 | 峰位于檢測(cè)器線性范圍之外 | 稀釋或濃縮使之處于線性區(qū)內(nèi) |
最初幾次進(jìn)樣-樣品在樣品池或柱中被吸附;自動(dòng)進(jìn)樣器;流路阻塞 | 用濃樣品處理樣品池/柱 |
自動(dòng)進(jìn)樣器流路阻塞 | 檢查流量情況,確保無(wú)阻塞現(xiàn)象 |
進(jìn)樣器樣品定量管未充滿 | 確保樣品池中已充滿樣品 |
在樣品制品時(shí)有關(guān)的樣品流失 | 用內(nèi)標(biāo)法在制備樣品,優(yōu)化樣品制備方法 |
柱平衡時(shí)間減慢（離子對(duì)現(xiàn)象） | 長(zhǎng)鏈離子對(duì)試劑平衡時(shí)間慢 | 使用較短的烷鏈試劑 |
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